阿維菌素類藥物殘留分析技術——提取方法

時間：2023-03-24 21:28:18來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

阿維菌素類藥物殘留分析技術——提取方法

[db:作者] / 2022-12-26 00:00

21.1.4 殘留分析技術

21.1.4.1 前處理方法

動物源食品基質主要包括動物組織、牛奶、水產品等，成分復雜，在對殘留AVMs進行分析測定前，一般需要進行樣品前處理，將痕量AVMs從復雜基質中富集出來。

(1)提取方法

在樣品提取前，必須進行充分的均一化，以保證樣品的代表性。在加入溶劑提取時，多數是使用均質器進行提取，以保證提取效率。AVMs常用的提取方法主要有液液萃取(LLE)、加壓溶劑萃取(PLE)、分散液液微萃取(DLLME)和超臨界流體萃取(SFE)。

1)液液萃取(liquid liquid extraction，LLE)

鑒于AVMs的高脂溶性，可用多種有機溶劑進行提取，水溶性的有機溶劑如乙腈、甲醇，與基質的互溶性較好；乙酸乙酯、異辛烷也有采用。

楊君宏等采用乙腈振蕩提取牛肌肉組織中的AVM、IVM和EPR，酶聯免疫(ELISA)試劑盒測定。空白牛肌肉組織中以5ng/g、10ng/g和20ng/g濃度添加時，AVMs回收率為70.9%～108.6%，變異系數(CV)為3.7%～17.1%。王亮用乙腈高速(10000r/min)勻漿提取牛肉中IVM殘留，沉淀物用乙腈重復提取，經固相萃取凈化后，高效液相色譜法(HPLC)測定。方法檢出限(LOD)為0.05μg/mL，在1～100μg/mL范圍內，回收率在75.9%～96.3%之間。鄭衛東等建立了豬肝臟中AVM和IVM殘留量的檢測方法。豬肝樣品均質后用乙腈提取，固相萃取柱凈化后，采用液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)檢測。該方法LOD均為2.0ug/kg，定量限(LOQ)為5.0ug/L；在添加水平2～20μg/kg范圍，AVM和IVM的平均回收率分別為77.0%～83.3%和76.9%～79.8%，相對標準偏差(RSD)分別小于12.1%和13.0%。盧志曉等采用乙腈提取凍蝦中AVM、IVM、DOR和EPR殘留，超高效液相色譜-串聯質譜法(UPLC-MS/MS)測定。4種分析物在2μg/kg、10μg/kg、20μg/kg加標水平的平均回收率為75.1%～92.5%，RSD為6.78%～9.89%；四種AVMs的LOD均可達到0.5μg/kg。賈方等用乙腈提取牛筋樣品中的AVM和IVM，經固相萃取柱凈化和衍生化后，用HPLC分析。AVM和IVM的LOD分別為2.5～4.0ng/g；在3個加標濃度水平下，AVM和IVM的回收率在81.6%～101.0%和101.5%～102.4%之間，RSD均不大于2.0%。

程林麗等用乙腈提取牛奶中殘留的AVM、IVM、DOR和EPR，加水和微量三乙胺稀釋，固相萃取柱凈化，氮氣吹干并衍生化后，用HPLC測定。在2～1000ug/kg添加范圍，各藥物的回收率為70.2%～110.4%，批內CV為3.9%～8.2%，批間為5.1%～8.2%；EPR、AVM、DOR和IVM的LOD依次為0.5μg/kg、0.5μg/kg、0.4μg/kg和0.2μg/kg，LOQ依次為1.8μg/kg、1.6ug/kg、1.3μg/kg和0.8μg/kg。石艷麗等用乙腈作為血漿中蛋白質的沉淀劑和DOR的提取劑，離心后上清液旋轉蒸干，固相萃取凈化后，HPLC測定。方法LOD為0.1ng/mL；樣品的回收率為89.5%～95.67%，不同濃度水平的日內CV和日間CV分別小于4%和5%。汪芳等建立了犬血漿中SEL含量的檢測方法。用乙腈作為血漿蛋白沉淀劑，固相萃取柱進行凈化，HPLC檢測。方法的LOD為0.25ng/mL，CV為1.47%～3.31%，樣品平均回收率為94.0%。

張文娟等建立了10種食品基質中AVM、IVM、DOR、EPR、MOX和SEL的殘留分析方法。采用乙腈提取，經固相萃取凈化后，UPLC-MS/MS測定。3個添加水平下，6種藥物的回收率在60%～99%之間，RSD為0.2%～8.9%；6種藥物的LOQ均達5.0μg/kg。張睿等建立了同時檢測動物源性食品中的AVM、IVM、DOR、MOX殘留量的方法。樣品經乙腈提取，固相萃取小柱凈化和衍生后，再用HPLC進行檢測。方法LOD達到0.001mg/kg，回收率在92%～101%之間。

楊君宏等采用甲醇震蕩提取牛肝中的AVM、IVM和EPR，ELISA試劑盒測定。空白牛肝臟組織中以20ng/g、50ng/g和100ng/g濃度添加時，AVMs回收率為53.8%～80.4%，CV為3.4%～17.9%。Massarollo等建立了蜂蜜中AVM的測定方法，采用甲醇-乙酸乙酯-正已烷提取，固相萃取凈化后，HPLC測定。方法回收率為73.4%～97.45%，RSD在0.91%～13.7%之間；LOD和LOQ分別為0.002和0.007mg/kg。

徐英江等研究了水產品中IVM、AVM、EPR、DPR的分析方法。樣品用異辛烷進行提取，經液液萃取凈化和衍生后，HPLC檢測。所有藥物的LOD均能達到1.0μg/kg。在添加1～50μg/kg濃度范圍，平均回收率為78.9%～106%，RSD為5.8%～11.2%。Hino等采用異辛烷提取牛組織中的AVM及其代謝物、IVM、EPR、DOR和MOX殘留，LC-MS/MS測定，基質匹配標準曲線定量。方法回收率在87.9%～99.8%之間，日內精密度為1.5%～7.4%，日間為1.5%～8.4%。

2)加壓溶劑萃取(pressurized liquid extraction，PLE)

PLE是指在較高的溫度(50～200℃)和壓力(1000～3000psi或10.3～20.6MPa)下，用溶劑萃取固體或半固體樣品的新額的樣品前處理方法。與傳統提取方式相比，PLE速度快、溶劑用量少、萃取效率高、待測組分回收率好，可實現全自動安全操作。Xia等采用加壓溶劑萃取(PLE)提取牛組織中的4種AVMs。以乙腈-水(40+60，v/v)為提取溶劑，在100℃、10MPa下兩個靜態周期提取3分鐘，提取液經固相萃取凈化和衍生后，HPLC檢測。該方法回收率為84.8%～101.8%，RSD小于10.8%；LOD和LOQ分別為0.1～0.2μg/kg和0.5～0.6μg/kg。

3)分散液液微萃取(dispersive liquid liquid microextraction，DLLME)

DLLME是2006年才問世的一種新型微萃取技術。它基于使用微量注射器將微升級萃取劑快速注入樣液內，在分散劑-水相內形成萃取劑微珠，很大地擴展了有機萃取劑和水樣之間相接觸面，大大加快了萃取平衡的速度，使目標化合物迅速萃入萃取劑微珠內，提高了萃取效率和富集倍數。Campillo等采用DLLME提取奶中的EPR、AVM、DOR、MOX和IVM。樣品采用三氯乙酸溶液沉淀蛋白，再用2mL乙腈-氯仿(9+1，v/v)提取，HPLC和LC-MS/MS測定HPLC方法的LOQ為1.0～4.7ng/g，LC-MS/MS為0.1～2.4ng/g；在0.5～50ng/g添加濃度范圍，方法回收率為89.5%～105%，RSD小于9%。

4)超臨界流體萃取(supercritical fluid extraction，SFE)

SFE是20世紀70年代末發展起來的一種新型物質分離技術，它是-種利用超臨界狀態下的流體作為提取劑進行萃取的方法，與傳統萃取法相比離效率高，可通過改變溫度、壓力或添加少量的有機溶劑，優化萃取過程，提高提取效率。超臨界流體CO2的使用相對較多，具有低毒、低成本、易處理、化學穩定性好、易于達到臨界參數(臨界溫度31℃，臨界壓力74bar)等特點。SFE能同時完成萃取和分離，其分離效率高，操作周期短，傳質速度快，溶解力強，選擇性高，且不污染環境。Danaher等報道了采用SFE技術提取凈化動物肝臟中AVM、IVM、EPR、DOR和MOX殘留的分析方法。將2.5g勻漿后的樣品與4g硅藻土混勻，脫水干燥后，放入兩端封有聚丙烯棉和2g堿性氧化鋁的萃取池。在100℃、300bar下用超臨界CO2萃取，流速5L/min、AVMs被在線堿性氧化鋁阱吸附，再用4mL甲酸-乙酸乙酯(70+30，v/v)洗脫，60℃下氮氣濃縮，衍生后，用HPLC測定。在4μg/kg和20μg/kg添加濃度，該方法平均回收率為76%和97%，日內和日間RSD分別小于10%和16%；LOQ達到2ug/kg。該方法還被用于豬肝和羊肝的分析。Brooks等采用SFE方法提取動物組織中的AVM時，在超臨界流體CO2中加入9%改性劑-乙二醇甲醚(2-methoxyethanal，EGMME)，以提高萃取效率。在22ng/g添加濃度下，沒有發現干擾物。

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