高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定動(dòng)物源性食品中8種甲狀腺拮抗劑殘留量

時(shí)間：2023-03-24 21:51:56來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定動(dòng)物源性食品中8種甲狀腺拮抗劑殘留量

[db:作者] / 2022-12-22 00:00

19.2.2.1 適用范圍

適用于牛肉、牛奶、豬肉、雞肉、雞肝、雞蛋、兔肉、兔肝中硫脲嘧啶、甲巰咪唑、甲基硫氧嘧啶、丙硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶和2-巰基苯并咪唑殘留的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。本方法的測定低限為：硫脲嘧啶、甲巰咪唑50μg/kg；甲基硫氧嘧啶、2-巰基苯并咪唑30μg/kg；丙硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶5μg/kg。

19.2.2.2 方法原理

采用乙酸乙酯提取試樣中殘留的硫脲嘧啶、甲巰咪唑、甲基硫氧嘧啶、丙硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶和2-巰基苯并咪唑，提取液經(jīng)液液分配和HLB固相萃取柱凈化后，采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜定性檢測，內(nèi)標(biāo)法定量。

19.2.2.3 試劑和材料

甲醇、甲酸、乙酸乙酯、正已烷、乙腈：高效液相色譜級；磷酸、巰基乙醇、二水乙二胺四乙酸二鈉：分析純；無水硫酸鈉：650℃灼燒4h，置于干燥器中備用。

0.1mol/L乙二胺四乙酸二鈉溶液：準(zhǔn)確稱取37.2g二水乙二胺四乙酸二鈉，用水溶解并定容至1L；乙腈飽和的正己烷：量取正己烷80mL于100mL分液漏斗中，加入適量乙腈后，劇烈振搖，待分配平衡后，棄去乙腈層；0.1%甲酸水溶液：準(zhǔn)確量取1mL甲酸，用水定容至1L；0.0025mol/L磷酸：準(zhǔn)確量取0.2mL磷酸，用水定容至1L；溶解液：90mL 0.1%甲酸水溶液中加入10mL甲醇。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：硫脲嘧啶(2-thiouracil，TU)、甲巰咪唑(methimazole，TAP)、甲基硫氧嘧啶(methyl thiouracil，MTU)、丙硫氧嘧啶(propyl thiouracil，PTU)、苯基硫氧嘧啶(phenyl thiouracil，PhTU)、2-巰基苯并咪唑(2-mercaptobenzimidazole，MBI)，純度均≥99%。

內(nèi)標(biāo)物質(zhì)：5，6-二甲基硫氧嘧啶(5，6-dimethyl-2-thiouracil，DMTU)，純度≥99%。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取適量標(biāo)準(zhǔn)品(精確至0.0001g)，用甲醇溶解，配制成濃度為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，-18℃冷凍避光保存，有效期3個(gè)月。

混合中間標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確移取各1mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成濃度為10μg/mL的混合中間標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃冷藏避光保存，有效期1個(gè)月。

混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：根據(jù)需要用甲醇把混合中間標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成適合濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取適量5，6-二甲基硫氧嘧啶(精確至0.0001g)，用甲醇溶解，配制成濃度為100μg/mL的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，-18℃冷凍避光保存，有效期3個(gè)月。

內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確移取0.1mL內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成濃度為1μg/mL的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，4℃冷藏避光保存，有效期1個(gè)月。

氮?dú)猓杭兌取?99%。氬氣：純度9999%。

HLB固相萃取柱：200mg，6mL，或相當(dāng)者。

微孔濾膜：0.20um，有機(jī)相。

19.2.2.4 儀器和設(shè)備

液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜儀：配備電噴霧離子源(ESI)；組織搗碎機(jī)；分析天平：感量0.0001g，0.01g；均質(zhì)器：10000r/min；振蕩器；離心機(jī)：10000r/min；氮吹儀；旋渦混合器；超聲波水浴；減壓濃縮儀；梨形瓶：100mL；具塞塑料離心管：50mL；刻度試管：10mL；移液槍：5mL，1mL，200μL；分液漏斗：50mL。

19.2.2.5 樣品前處理

(1) 試樣制備

a.肌肉和內(nèi)臟：從原始樣品取出有代表性樣品約500g，用組織搗碎機(jī)充分搗碎混勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣，密封，并標(biāo)明標(biāo)記。將試樣置于-18℃冷凍避光保存。

b.奶：從原始樣品取出有代表性樣品約500g，充分?jǐn)嚢杌靹颍殖蓛煞荩謩e裝入潔凈容器作為試樣，密封，并標(biāo)明標(biāo)記。將試樣置于4℃冷藏避光保存。

c.蛋：從原始樣品取出有代表性樣品約500g，去殼后用組織搗碎機(jī)攪拌充分混勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣，密封，并標(biāo)明標(biāo)記。將試樣置于4℃冷藏避光保存。

注：在制樣的操作過程中，應(yīng)防止樣品污染或發(fā)生殘留物含量的變化。

(2)提取

稱取約5g試樣(精確至0.01g)于50mL塑料離心管中，依次加入150μL內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液、50uL巰基乙醇、30μL 0.1mol/L的乙二胺四乙酸二鈉溶液和適量無水硫酸鈉，吸去樣品中的水分，再加入20mL乙酸乙酯，用均質(zhì)器以10000r/min均質(zhì)1min后，振蕩提取20min，再以4000r/min離心5min，收集上清液于100mL梨形瓶中。殘?jiān)?0mL乙酸乙酯再提取一次，合并上清液，在40℃水浴中減壓濃縮至近干。殘留物用10mL乙腈溶解，并轉(zhuǎn)移至50mL分液漏斗中，用30mL乙腈飽和后的正己烷分三次液液分配，去除油脂。收集乙腈層，在40℃水浴中減壓濃縮至近干，殘留物用10mL 0.0025mol/L磷酸溶解，超聲波水浴助溶5min后，待凈化。

(3)凈化

HLB固相萃取柱依次用5mL甲醇、5mL水預(yù)淋洗后，轉(zhuǎn)入10mL樣品提取液。先用5mL水進(jìn)行淋洗，棄去；再用5mL甲醇進(jìn)行洗脫，收集洗脫液于10mL刻度試管中。整個(gè)固相萃取凈化過程控制流速不超過2mL/min。洗脫液在40℃下用N2吹干。殘留物用1mL溶解液溶解，渦動(dòng)1min后，過0.2um微孔濾膜，供儀器檢測。

(4) 混合基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

稱取5份約5g陰性試樣(精確至0.01g)于50mL塑料離心管中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線最終定容濃度分別加入混合中間標(biāo)準(zhǔn)溶液或混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，再加入150uL內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液，余下操作按上述提取步驟操作。

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