鎮靜劑類藥殘留分析技術——提取方法

時間：2023-03-25 01:14:31來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

鎮靜劑類藥殘留分析技術——提取方法

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

(2)提取方法

1)巴比妥類

乙腈和乙酸乙酯是巴比妥類藥物提取中最常用的有機溶劑。

戴曉欣等4采用乙酸乙酯提取水產品中的苯巴比妥，回收率在80.49%～ 102.42%之間，RSD為1.52%～10.15%，方法LOD為10 μg/kg， LOQ為30 μg/kg。由于魚肉的含水量較高，用乙腈和甲醇提取時，會將大量的水和水溶性雜質提取出來，后面旋轉蒸發時間長，測定時有干擾；而用乙酸乙酯作提取溶劑，旋轉蒸發時間減少近一半，乙酸乙酯更適合作為水產品提取劑。趙海香等提取豬肝與豬腎中4種巴比妥藥物。樣品加入無水硫酸鈉和乙腈，30℃下超聲提取30 min，超聲功率450 W，離心后取上清液進一步凈化，氣相色譜-質譜(GC-MS)測定，外標法定量。4種藥物的LOD，豬肝中不高于0.65 μg/kg，豬腎中不高于1.00 ug/kg； LOQ在豬肝中不高于2.20 ug/kg，豬腎中不高于3.35 μg/kg；4種藥物回收率為68%～90%，RSD 均低于10%。該作者7還采用加速溶劑萃取(ASE)技術提取豬肉中的巴比妥、異戊巴比妥和苯巴比妥殘留。采用乙腈作提取溶劑，壓力10.3 MPa持續30 min，溶劑揮發后再進一步固相萃取柱凈化。方法平均回收率為84.0%～ 103.0%，變異系數(CV)為1.6%～12%，LOD 為0.5 μg/kg，LOQ為1μg/kg。

巴比妥類藥物呈酸性，酸性條件下以分子狀態存在，更易進入有機溶劑，能提高提取效率。

我國檢驗檢疫行業標準SNT 2217-2008用酸性乙腈提取雞肉、豬肉、豬肝和魚肉中的苯巴比妥、戊巴比妥、異戊巴比妥和司可巴比妥等6種巴比妥類藥物，LC-MSMS測定，方法LOD為1 μg/kg，回收率為78.6%～110%。Wang等測定動物和水產品可食性組織中巴比妥類藥物，用無水硫酸鈉、酸化乙腈提取，30℃下超聲波輔助提取10 min，LC-MS/MS測定，方法平均回收率79.6%～ 108%，CV小于11%， LOQ為0.5 μg/kg。王勇等先用鹽酸(pH 1～2)酸化動物心、肝、脾、肺、腎，再用乙醚提取組織中的苯巴比妥。研究發現乙醚提取效率比乙腈高，但提取雜質也多。血液中的巴比妥類藥物，可用酸性緩沖溶液(pH 2)直接沉淀蛋白后進樣；或用乙腈-甲醇、乙酸乙酯將巴比妥類藥物提取至有機相，有機提取液經離心過濾后-般不再凈化，可吹干轉換到合適溶劑直接測定或衍生化后測定。如果與其他類藥物同時提取，則要綜合考慮各因素，采取合適提取溶劑。

2)苯二氮卓類

苯二氮卓類藥物主要用乙腈、乙酸乙酯等有機溶劑提取。同時，利用苯二氮卓類藥物的堿性特性，在堿性環境下采用有機溶劑提取可提高提取效率。

Gunn等測定血清和全血中12種苯二氮卓類藥物(包括阿普唑侖、替馬西泮、奧沙西泮、去甲西泮、氯硝西泮、勞拉西泮、地西泮、利眠寧、咪達唑侖、氟硝西泮、7-氨基氯硝西泮和7-氨基氟硝西泮)時，用4℃冷乙腈沉淀蛋白，渦動提取，提取液轉換溶劑后進超高效液相色譜串聯質譜(UPLC-MS/MS)分析。該方法較為簡單，但靈敏度較低。張玉潔等1[1采用乙腈提取豬肉中的地西泮殘留，在30℃水浴中超聲提取10 min。對常用溶劑乙腈、乙酸乙酯、乙腈-水(90+10，v/v)進行比較試驗，發現乙腈提取效率最高，雜質最少；乙酸乙酯提取效率也較高，但雜質多于前者。該試驗還對30℃、10min超聲輔助提取(UAE)和振蕩提取兩種條件下的提取效率和雜質情況進行了比較，結果發現超聲提取效率高，雜質溶解少，而振蕩提取的提取效率低，共提取雜質卻多于前者。汪麗萍等可用乙腈提取豬肉中的地西泮、艾司唑侖、阿普唑侖、三唑侖等4種苯二氮卓類藥物。地西泮回收率為60%～70%，RSD為7.6%～12.9%， LOD為2 μg/kg；艾司唑侖、阿普唑侖、三唑侖等3種藥物回收率為60%～115%，RSD 為3.8%～19.7%，LOD為10 μg/kg。我國內貿行業標準SB/T 10501-200817，用乙腈提取畜禽肉中的地西泮，勻漿肌肉組織加乙腈在超聲波水浴中提取10min。方法LOD為10μg/kg，回收率為70%～9%。

黃士新等測定豬血漿和尿液中的地西泮，對二氯甲烷、正已烷、乙酸乙酯等不同溶劑的提取效率進行了比較，發現乙酸乙酯提取回收率較高且易于濃縮，作為提取溶劑效果最佳。該方法回收率為81.6%～105.4%，RSD 為3.8%～13.6%，LOD為0.5 ug/L。Jang 等用乙酸乙酯提取唾液中25種苯二氮卓類藥物，提取液直接進樣分析，LOD 為0.01～0.5 ng/mL，LOQ為0.1 ～0.5 ng/mL，回收率為81%～95%。孫雷等測定豬肉和腎臟中的甲喹酮、奧西泮、地西泮、硝西泮和替馬西泮等10種鎮靜劑。研究發現在酶解后，用氫氧化鈉溶液調節體系pH 9.7±0.2，然后分別用乙酸乙酯和叔丁基甲醚進行提取，再采取低溫脫脂、高速離心等辦法進行凈化，每種藥物均獲得了滿意的回收率，且能很好地去除雜質干擾。10 種鎮靜劑的LOD為0.5 μg/kg， LOQ為1 μg/kg，回收率為64.5%～111.4%。錢曉東等用含1%氨水的乙酸乙酯提取水產品中的地西泮及其代謝物，平均回收率為82.1%～119.0%。但肌肉中的大量脂肪亦被同時提取出，需要進一步脫脂凈化。于慧娟等用1%氨化乙酸乙酯提取魚類樣品中的地西泮及其代謝物去甲地西泮、替馬西泮和奧沙西泮殘留，平均回收率為85.7%～105.6%。

謝秀紅等建立GC-MS法同時定性分析血液中的安定、硝基安定、氯硝安定、三唑侖、艾司唑侖和阿普唑侖殘留。樣品用乙醚萃取，50℃水浴中N2吹干，殘留物用乙醇溶解后進樣分析，方法LOD為5 μg/L。Lee等用甲醇提取毛發中的地西泮、勞拉西泮、去甲地西泮、奧西泮、替馬西泮、咪達唑侖和唑吡坦殘留，毛發剪碎后用甲醇38℃提取16 h，提取后用固相萃取凈化，GC-MS測定。地西泮、勞拉西泮、去甲地西泮、奧西泮、替馬西泮的LOD為5 ng，咪達唑侖和唑吡坦的LOD為10ng，LOQ均為10～20 ng，回收率為71%～103%。Fermandez 等建立了微波輔助萃取(MAE) 血漿中阿普唑侖、溴西泮、地西泮、勞拉西泮、氯甲西泮和硝西泮的方法。用8 mL氯仿-丙醇(4+1，v/v)于89℃萃取13 min，回收率為(89.8%±0.3%)～(102.1%±5.2%)。研究表明，萃取時間明顯影響萃取效率。

3)吩噻嗪類

吩噻嗪類藥物極性有較大差異，其中，異丙嗪極性較小，而賽拉嗪極性較大，常根據極性用氯仿、乙酸乙酯、乙腈和乙醚等提取。但乙醚易生成過氧化物，對氯丙嗪等藥物的萃取率影響較大，常加入維生素C以消除過氧化物對吩噻嗪類藥物的氧化作用，提高回收率。同時，本類藥物均顯堿性，在堿性環境下脂溶性升高，用堿性有機溶劑提取，效率提高。

Delahaut等用乙腈提取豬組織中的乙酰丙嗪、氯丙嗪、丙酰丙嗪、阿扎哌隆等藥物。用乙腈振蕩提取15 min，肌肉和腎臟的回收率均大于90%。洪月玲等比較了甲醇和乙腈提取豬肉及蝦肉中氯丙嗪的效率，試驗表明乙腈提取率高，雜質少，提取回收率為80%～101%。Tanaka等用乙腈直接提取血清中的氯丙嗪、左米丙嗪、甲哌丙嗪、奮乃靜和異丙嗪等12種吩噻嗪類藥物后進樣測定，回收率為87.6%～99.8%，檢測限為3.2～5.5ng/mL。李春風等用含1%濃氨水的乙腈溶液提取水產品中的氯丙嗪、乙酰丙嗪、丙酰丙嗪、異丙嗪、甲苯噻嗪等5種吩噻嗪類藥物效果較好。采用氨化乙腈溶液提取，可抑制堿性吩噻嗪類化合物的離子化程度，降低極性，從而提高其在乙腈中的溶解度。氨化乙腈還用于均質提取步驟，可提高吩噻嗪類藥物提取效率，平均回收率為75.7%～87.7%，RSD為9.0%～15.2%。

Cheng等報道了用乙酸乙酯提取豬組織中地西泮、氯丙嗪、異丙嗪和安眠酮的方法。對乙腈、0.1 mol/L鹽酸-乙腈(5+95，v/v)、乙酸乙酯、氨水-乙醚(5+95，v/v)、氨水-二氯甲烷(5+95，v/v)、氨水-叔丁基甲基醚(5+95，v/v)和氨水-乙酸乙酯(5+95，v/v)的提取回收率和凈化程度進行比較，最后選擇乙酸乙酯提取。方法LOD為0.2～0.3μg/kg，L0Q 為0.5～1μg/kg，平均回收率為87.6%～106.8%。陳國征用乙酸乙酯提取尿液中氯丙嗪，方法LOD為0.05 ug/mL，CV為3.05%～4.15%，樣品加標回收率為98.1%～101%。呂燕等用乙酸乙酯和1 mol/L氫氧化鈉溶液提取豬肝中的氯丙嗪，平均回收率為80.2%～90.6%，RSD為5.9%-8.6%，LOD為1 ug/kg。鄭水慶等測定血液中的氯丙嗪時，加入同位素內標地西泮-d5，在大于pH 10條件下用乙酸乙酯-苯(1+1，v/v)提取，回收率為79.9%～85.5%，LOD 為0.3 ng/mL。

Holland等用氯仿提取腎臟中的賽拉嗪及其代謝物2，6-二甲基苯胺(2，6-dimethylaniline)。該提取液直接用于硅藻土固相萃取凈化后高效液相色譜(HPLC)測定。牛腎中塞拉嗪和2，6-二甲基苯胺的平均回收率分別為78.3%和87.2%，CV分別為9.51%和9.61%；豬腎中塞拉嗪和2，6-二甲基苯胺的平均回收率分別為80.8%和86.7%，CV分別為7.33%和7.10%。

朱礫等建立了血液中氯丙嗪的測定方法。取血清0.4 mL加內標安定120 ng，再加入1 mol/L NaOH 0.2 mL，加含維生素C的乙醚4mL，旋渦振蕩2min，靜置1h，取上清液3.5 mL， 40℃水浴氮氣流下吹干，用150 μL流動相溶解殘留物，取60 μL進行HPLC分析?；厥章试?2.0%～99.4%之間，LOD為10 ng/mL。蘇海濱等IBS用特丁基甲醚-乙腈～5mol/L氫氧化鈉溶液(12+0.2+0.2，v/v)提取牛奶中的乙酰丙嗪、氯丙嗪、賽拉嗪等8種鎮定劑殘留。牛奶中的回收率在86.29%～92.49%之間，RSD在8.99%～20.56%之間；奶粉中的回收率在81.59%～97.49%之間，RSD 在1.76%～16.70%之間；牛奶中的LOD為0.1～0.5 μg/kg，奶粉為0.8～4.0 μg/kg。

4)丁酰苯類

丁酰苯類藥物均呈堿性，殘留提取同樣根據極性和酸堿性選用合適的溶劑提取。

Cerkvenik-Flajs等用乙腈提取豬腎臟中阿扎哌隆和阿扎哌醇，提取液酸化后用MCX固相萃取凈化，HPLC測定。阿扎哌隆和阿扎哌醇的平均回收率分別為88.2%和91.2%，實驗室內CV分別小于11.0%和9.0%；LOD分別為1.1 μg/kg和1.2 μg/kg， LOQ為5 μg/kg和10 μg/kg。Zawadzka等用乙腈提取豬腎臟和肝臟中阿扎哌隆，回收率為91.2%～107.0%，檢測限(CCa)和檢測能力(CCβ)分別為125.9 ug/kg和160.0 μg/kg。

Aoki等用1 mol/L NaOH堿化動物組織，使阿扎哌隆和阿扎哌隆呈分子態，再加入正已烷，將藥物從堿性組織溶液中萃取入正己烷中。兩種藥物的LOD均為0.025μg/g，回收率均大于72%。我國國家標準GB/T20763-2006(39)在堿性條件下用特丁基甲醚提取豬肉中氟哌啶醇、阿扎哌酮和阿扎哌隆等藥物，提取效率較高，回收率均大于90%。

5)多種類同時提取

多種類鎮靜劑類藥物同時提取和測定，大大提高了檢測效率。

常青等建立了體液中巴比妥、異戊巴比妥、苯巴比妥、奧沙西泮、地西泮、硝西泮、氯硝西泮、艾司唑侖、阿普唑侖和三唑侖的定性定量分析方法。血漿樣品經0.1 mol/L氫氧化鈉溶液堿化后，用乙酸乙酯萃取，萃取液經氮氣吹干，再用乙酸乙酯溶解后進行GC-MS分析。10 種藥物的回收率均在92%～117%之間，日內、日間RSD在4.09%～ 14.26%范圍內，LOD為2～20 μg/L。Bock等開發了一種運用LC-MS/MS測定豬和牛腎臟中鎮靜劑阿扎哌隆和它的代謝產物阿扎哌醇、氯丙嗪、丙酰丙嗪和乙酰丙嗪、氟哌啶醇和甲苯噻嗪等藥物的方法。使用豬的腎臟作為污染的動物樣品，測試和驗證了不同種類的溶劑以及萃取和凈化方式。提取率最高的方法是采用氨水和乙酸乙酯的混合液，振蕩提取，不需固相萃取凈化。

Mitrowska等用乙腈提取豬、牛腎臟中氯丙嗪、丙酰丙嗪、乙酰丙嗪、三氟丙嗪等吩噻嗪類藥物，以及阿扎哌隆和阿扎哌醇的藥物殘留。提取物用C18固相萃取柱凈化后，用LC-MS/MS測定。方法回收率為73.2%～110.6%，CV小于13.0%；CCa為：吩噻嗪類5.8～6.6μg/kg，阿扎哌隆105.5μg/kg，阿扎哌醇121.4μg/kg，CCβ為：吩噻嗪類6.3～7.6μg/kg，阿扎哌隆119.0μg/kg，阿扎哌醇140.0μg/kg。Zhang等用乙腈同時提取組織中的11種鎮靜劑(苯巴比妥、艾司唑侖、咪達唑侖、地西泮、硝西泮、癸氟奮乃靜、氯丙嗪、乙酰丙嗪、氟哌啶醇、塞拉嗪、阿扎哌醇)。通過比較甲醇、乙腈和乙酸乙酯作為提取液，發現乙腈的提取效果最好，雜質少，回收率最高。豬、牛肌肉、腎臟、肝臟中藥物回收率在76.49%～118.6%之間，CV為2.2%～19.9%，LOQ為0.5～2.0μg/kg。

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