喹諾酮類藥物殘留分析技術測定方法（四）

時間：2023-03-25 02:42:42來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

喹諾酮類藥物殘留分析技術測定方法（四）

[db:作者] / 2022-12-19 00:00

(6)自組裝環(huán)熒光顯微成像技術(self-ordered ring fluorescence microscopic imaging technique)自組裝環(huán)(selforderedring，SOR)熒光顯微成像技術是通過分析物在環(huán)線上沉積后，運用倒置熒光顯微鏡，以電荷耦合元件攝像系統(tǒng)作為顯微鏡圖像獲取技術采集圖像，將圖像信號轉換成電信號輸入計算機進行數(shù)據(jù)讀取及圖像處理，然后應用軟件對獲得圖像讀取相關參數(shù)進行分析。它具有背景干擾小、耗樣量少、簡單、快速及對環(huán)境無污染等優(yōu)點。鄧鳳玉等采用自組裝環(huán)熒光顯微成像技術測定生物樣品中的托氟沙星(TOS)，在pH 10.50的氨-氯化銨緩沖溶液和聚乙烯醇-124(PVA-124)介質中，以Mn2+和十六烷基三甲基溴化胺(CTMAB)為敏化劑，TOS在疏水性玻片表面形成自組裝環(huán)，建立了檢測TOS的快速方法。當點樣體積為0.20μL時，線性范圍為4.05×10-14～4.28×10-13 mol/ring，LOD為4.10×10-15 mol/ring；兔子灌喂TOS藥片后血清中TOS濃度的加標回收率為90.0%～105.0%，RSD為1.9%～3.3%；羊組織樣品中TOS加標回收率在92.0%～101.0%，RSD小于2.7%。Dong等在疏水性載玻片上，利用SOR熒光顯微成像技術，以Zn2+和CTMAB作為增敏劑，PVA-124及氨-氯化銨緩沖溶液(pH10.00)為介質，建立了雞血清、雞肉、雞脂中司帕沙星(SPA)殘留量測定方法。滴定體積為0.20μL，測定范圍在1.38×10-13～2.03×10-12 mol/ring之間(或6.90×10-8mol/L)；以甲醇或乙腈為提取劑，SPA在所有添加水平的回收率均在90.74%～106.61%內，RSD小于3.0%。

(7)生物傳感器法(biosensor)

1)分子印跡傳感器(molecularly imprinted sensor)

當模板分子(印跡分子)與聚合物單體接觸時會形成多重作用點，通過聚合過程這種作用就會被記憶下來，當模板分子除去后，聚合物中就形成了與模板分子空間構型相匹配的具有多重作用點的空穴，這樣的空穴將對模板分子及其類似物具有選擇識別特性。Xuan-Anh等建立了基于分子印跡聚合物(MIP)的非競爭性熒光偏振(FP)方法來檢測牛奶中的ENR。FP是一種熒光標記檢測技術，它把熒光物質標記在特定物質分子，使原本微弱的反應信號轉化成較強的熒光信號，同時在光路的合適位置分別加上起偏器和檢偏器就可測出待測物的偏振熒光強度，大大提高了方法的靈敏度和特異性。FP法不需分離游離和結合的示蹤物，而且所有測定在溶液中進行，可以達到真正的平衡，因而具有所需的樣品量少、靈敏度高、重復性好、操作簡便等多種優(yōu)勢。QNs本身具有較強的熒光可建立非競爭的直接FP方法，方法對ENR的LOD為36ng/L遠低于其在牛奶中的MRL，而且對DAN也有明顯的交叉反應。有機溶劑是常用且非常有效的樣品提取及蛋白沉淀試劑，然而抗體通常難以耐受較高濃度的有機溶劑。MIP是一種化學合成的識別分子，對有機溶劑有著很高的耐受力，該方法用兩倍于牛奶樣品體積的乙腈提取藥物，再用緩沖液1倍稀釋便可基本消除基質干擾，直接進行熒光偏振檢測，這說明其至少可耐受30%的乙腈。

2)表面等離子共振傳感器(surface plasmon resonance sensor)

表面等離子共振(SPR)技術具有靈敏度高、操作簡單、能夠實時監(jiān)測反應的動態(tài)過程，只需對樣品進行簡單的預處理，無需進行標記，也可以無需純化各種生物組分，耗樣量少，檢測時間短，已被廣泛應用于各個研究領域。Marchesini等建立了基于SPR的雙通道檢測方法來篩選雞肉中的QNs殘留。其中1號通道加入廣譜性多抗可同時檢測NOR、CIP、ENR、SAR和DIF五種化合物，其半數(shù)抑制濃度(IC50)在2～10ng/L，平均回收率74%；2號通道選擇特異性多抗檢測FLU的IC50為2.7ng/L，平均回收率88%。同時將此方法與高解析LC-QTOF/MS串聯(lián)，可在篩選后及時進行質譜確證。Huet等建立了魚肉、雞肉和雞蛋中13種QNs(NOR、SAR、DIF、CIP、PEF、OFL、FLU、OXO、DAN、ENR、MAR、LOM和ENO)的SPR殘留檢測方法。以NOR為標準參照，在雞肉、雞蛋和魚肉中的CCa分別為0.13μg/kg、0.29μg/kg和0.30μg/kg，IC50分別為1μg/kg、1.5μg/kg和3.1μg/kg，在雞蛋和雞肉基質中的檢測范圍為0.1～10μg/kg，在魚肉基質中的檢測范圍為0.1～100ug/kg。Mellgren等研制了檢測牛奶中ENR及其代謝物CIP的SPR免疫傳感器，其探頭表面覆蓋著可更換的固定有ENR的傳感膜，當固定ENR與制備的抗體發(fā)生結合反應時，引起探頭表面折射系數(shù)變化，同時折射角發(fā)生位移，借此對樣品中待測物進行測定。ENR和CIP的LOD為1.5ug/kg，回收率分別為90%和86%，RSD分別為8.3%和7.5%。

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