液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定動物源性食品中玉米赤霉醇殘留量

[db:作者] / 2022-12-19 00:00

9.2.5.1 適用范圍

適用于動物肌肉、肝臟、魚肉、蛋和牛奶中玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇和玉米赤霉烷酮殘留量的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的測定。方法檢出限為1μg/kg。

9.2.5.2 方法原理

樣品經(jīng)β-葡萄糖苷酸/硫酸酯復(fù)合酶水解后，用乙醚提取，提取液經(jīng)液液分配、HLB固相萃取柱凈化后，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，外標(biāo)法定量。

9.2.5.3 試劑和材料

甲醇、乙腈：色譜純；無水乙醚、三氯甲烷、氫氧化鈉、乙酸鈉(NaAc·3H2O)、冰醋酸：分析純；磷酸：純度大于85%。

0.5mol/L氫氧化鈉溶液：稱取20g氫氧化鈉，用水溶解并定容至1L。

0.05mol/L乙酸鈉緩沖溶液：稱取6.8g乙酸鈉，用950mL水溶解，冰醋酸調(diào)節(jié)pH至4.8，定容至1L。

磷酸溶液(1+4，v/v)：10mL磷酸和40mL水混合。

甲醇-水溶液(1+1，v/v)：50mL甲醇和50mL水混合。

β-葡糖苷酸酶/硫酸酯酶：96000unit/mL β-葡糖苷酸酶；390unit/mL硫酸酯酶(H-2，F(xiàn)ormhelix pomatia)。

玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇和玉米赤霉烷酮標(biāo)準物質(zhì)：純度≥99%。

100μg/mL標(biāo)準儲備溶液：分別準確稱取適量標(biāo)準品(精確至0.1mg)，用乙腈溶解，配制成濃度為100ug/mL的標(biāo)準儲備溶液。-18℃以下冷凍避光保存。

10μg/mL和1.0μg/mL的混合標(biāo)準中間溶液：分別準確吸取1.0mL和0.10mL標(biāo)準儲備溶液于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成濃度為10μg/mL和1.0μg/mL混合標(biāo)準中間溶液。0～4℃冷藏避光保存。

基質(zhì)混合標(biāo)準工作溶液：根據(jù)需要，取適量的混合標(biāo)準中間溶液，用空白樣品提取液配成不同濃度的基質(zhì)混合標(biāo)準溶液。基質(zhì)混合標(biāo)準工作溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。

OasisHLB固相萃取柱或相當(dāng)者：500mg/6mL。使用前分別用5mL甲醇和5mL水預(yù)淋洗。濾膜：0.20μm。

9.2.5.4 儀器和設(shè)備

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)；組織搗碎機；分析天平：感量0.1mg和0.01g；移液器：10～100μL、100～1000μL；均質(zhì)器：10000r/min；渦旋混合器；恒溫振蕩器；離心機：4000r/min；pH計：測量精度±0.02pH單位；氮吹儀；固相萃取裝置；具塞離心管：50mL；刻度試管：10mL。

9.2.5.5 樣品前處理

(1) 試樣制備

實驗室樣品用組織搗碎機絞碎，分出0.5kg作為試樣。試樣置于-18℃冰箱，避光保存。

(2) 水解

稱取5g試樣(精確至0.01g)于50mL具塞離心管中，加入10mL乙酸鈉緩沖溶液和0.025mL β-葡萄糖苷酸/硫酸酯復(fù)合酶，旋渦混勻，于37℃水浴中振蕩12h。

(3) 提取

水解后加入15mL無水乙醚，振蕩提取5min后，以4000r/min離心2min，將上清液轉(zhuǎn)移至濃縮瓶中，再用15mL無水乙醚重復(fù)提取一次，合并上清液，40℃以下旋轉(zhuǎn)濃縮至近干。殘留物加1.0mL三氯甲烷溶解后，轉(zhuǎn)入10mL離心管中，再用3mL氫氧化鈉溶液潤洗濃縮瓶后轉(zhuǎn)移至同一離心管中，旋渦混勻，以4000r/min離心2min，吸取上層氫氧化鈉溶液。再用3mL氫氧化鈉溶液重復(fù)潤洗、萃取一次，合并氫氧化鈉溶液，加入1mL磷酸溶液，混勻后待凈化。

(4) 凈化

將樣品提取液轉(zhuǎn)入HLB固相萃取柱。用5mL水、5mL甲醇-水溶液淋洗，棄去；再用10mL甲醇進行洗脫，收集洗脫液。整個固相萃取凈化過程控制流速不超過2mL/min。洗脫液在40℃以下用氮氣吹干。殘留物用1.0mL乙腈溶解，旋渦混勻后，過0.2μm濾膜，供儀器測定用。

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