非甾類同化激素類藥殘留分析前處理方法——凈化（三）

時(shí)間：2023-03-25 03:38:32來(lái)源：food欄目：食品快速檢測(cè) 閱讀：

非甾類同化激素類藥殘留分析前處理方法——凈化（三）

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

6)基質(zhì)固相分散(matrix solid-phase dispersion，MSPD)

MSPD是將樣品與填料一起混合研磨，使樣品均勻分散于固定相顆粒表面，制成半固態(tài)后裝柱，然后根據(jù)“相似相溶”原理選擇合適的洗脫劑洗脫。該技術(shù)濃縮了傳統(tǒng)樣品前處理中勻漿、組織細(xì)胞裂解、提取、凈化等多個(gè)過(guò)程，避免了待測(cè)物在這些過(guò)程中的損失，提取凈化效率高、耗時(shí)短、節(jié)省溶劑、樣品用量少，但研磨的粒度大小和填裝技術(shù)的差別會(huì)使淋洗曲線有所差異，不易標(biāo)準(zhǔn)化。

A.二苯乙烯類

尹怡等建立了MSPD-GC-MS法測(cè)定水產(chǎn)品中DES殘留量，并對(duì)MSPD與SPE的凈化效果進(jìn)行了比較。稱取5g已絞碎混勻的肌肉于50mL具塞離心管中，加入5g Florisil與20mL乙酸乙酯，渦動(dòng)混合2min，4500r/min離心5min，將上清液轉(zhuǎn)移至100mL梨形瓶中，在剩余樣品中繼續(xù)加入15mL乙酸乙酯，重復(fù)上述操作，合并上清液，于40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，分2次加入10mL乙酸乙酯溶解殘留物，并轉(zhuǎn)移至50mL離心管中，加入5g的Florisil，渦動(dòng)混合2min，4500r/min離心5min，上清液氮?dú)獯蹈桑苌珿C-MS檢測(cè)。該方法回收率大于90%，LOD為0.3μg/kg，與SPE法相比，MSPD法更靈敏、簡(jiǎn)便、省時(shí)以及節(jié)省溶劑。

丁雅韻等采用MSPD和SPE結(jié)合的方法提取并凈化動(dòng)物肝臟中的DES。稱取0.5g勻漿后的樣品于玻璃研缽中，加入2g左右的C18填料(用30mL的乙酸乙酯、正己烷淋洗后風(fēng)干)，用研杵輕輕研磨使其混合均勻，在通風(fēng)櫥中自然風(fēng)干1h，均勻裝入10mL注射器簡(jiǎn)，用注射器活塞輕壓到3.5mL左右。用8mL正已烷分兩次洗滌玻璃研缽和研杵，并將洗滌液淋洗柱子，棄去淋洗液；再用8mL乙酸乙酯分兩次洗滌玻璃研缽和研杵，并用洗滌液洗脫柱子，收集乙酸乙酯洗脫液。氮?dú)獯蹈珊螅琒PE進(jìn)一步凈化，經(jīng)衍生化后，用毛細(xì)管GC-MS檢測(cè)。該方法LOD低于1μg/kg，不同DES添加量的回收率為81.6%～100.9%，CV為8.7%～13.2%。

劉宏程等采用MSPD法提取和凈化牛奶中的DES、HES和DIS。比較了3種填料C18、Florisil和N-丙基乙二胺(PSA)對(duì)牛奶中DES、HES和DIS的凈化效果。C18凈化效果差，蛋白等共萃物多；Florisil對(duì)3種雌激素吸附能力弱，脫蛋白凈化效果中等，共萃物多，選擇性差；而PSA對(duì)弱酸性的雌激素有離子作用吸附力。結(jié)果表明，PSA凈化效果最好。操作步驟為:稱取1g均質(zhì)樣品于研缽中，用稀氨水調(diào)pH8.5，加1g PSA填料，在通風(fēng)櫥中放置30min，揮干水分，充分研磨，均勻裝入底部墊上濾紙的10mL注射器，上層再墊一片濾紙，并把填料輕輕壓緊。用5mL二氯甲烷～甲醇(97+3，v/v)沖洗，再用5mL二氯甲烷甲醇(80+20，v/v)洗脫，洗脫液用氮?dú)獯抵两桑鲃?dòng)相溶解定容至0.25mL，經(jīng)0.45um濾膜過(guò)濾后，HPLC檢測(cè)g該有法平均回收率為84.1%～93.5%，RSD為3.5%～7.8%；DES、HES和DIS的LOD分別為0.004mg/kg、0.004mg/kg和0.006mg/kg，LOQ分別為0.01mg/kg、0.01mg/kg和0.02mg/kg。

Li等采用MSPD提取凈化奶和肉中的6種雌激素(包括DIS)。以C18和Florisil為混合填料，乙腈洗脫后，LC-MS/MS測(cè)定。該方法LOD為0.11～0.81ug/L，LOQ為0.61～2.20ug/L；回收率在59.6%～128.5%之間，RSD為1.2%～8.0%。

B.RALs

Lagana等采用MSPD方法提取和凈化魚(yú)組織中的ZON、a-ZOL和β-ZOL，方法分別以反相(C18)和正相(中性氧化鋁)填料作為基質(zhì)分散劑，GCB柱進(jìn)一步凈化，LC-MS/MS檢測(cè)。結(jié)果，在100ng/g的添加水平，C18為填料的回收率為83%～103%，CV低于11%；中性氧化鋁為填料的回收率為67%，CV低于18%，LOD為0.1～1.0ng/g。該作者又優(yōu)化了C18 MSPD方法，取勻漿的肌肉和肝臟組織0.50g放置于玻璃研缽中，再加入C18填料2.0g，充分研磨、混合，肉醬可以干燥或成粉狀，將混合物加到底部有濾板的聚四氟乙烯柱中，15mL甲醇-水(7+3，v/v)、10mL水、10mL酸化甲醇(10mmol/L甲酸)和3mL甲醇洗滌，15mL二氯甲烷-甲醇(8+2，v/v)洗脫，40℃水浴中氮?dú)獯蹈桑?50μL乙腈-甲醇-水(37+16+47，v/v)復(fù)溶，LC-MS/MS分析。并利用該方法研究了虹鱒魚(yú)體內(nèi)中ZON的代謝情況。

7)凝膠滲透色譜(gel permeation chromatography，GPC)

GPC柱內(nèi)裝有一定孔徑的填料，柱中可供分子通行的路徑有粒子間的間隙(較大)和粒子內(nèi)的通孔(較小)。當(dāng)樣品溶液流經(jīng)色譜柱時(shí)，較大的分子被排除在粒子的小孔之外，只能從粒子間的間隙通過(guò)，速率較快；而較小的分子可以進(jìn)入粒子中的小孔，通過(guò)的速率要慢得多。經(jīng)過(guò)一定長(zhǎng)度的GPC柱，分子根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量被分開(kāi)，相對(duì)分子質(zhì)量大的淋洗時(shí)間短，相對(duì)分子質(zhì)量小的淋洗時(shí)間長(zhǎng)，從而達(dá)到分離凈化目的。李佩佩等建立了GPC-SPE/HPLC法測(cè)定水產(chǎn)品中DES的分析方法。樣品經(jīng)乙醚超聲提取和漩渦振蕩后以乙酸乙酯_環(huán)已烷(1+1，v/v)為流動(dòng)相進(jìn)行GPC凈化，再過(guò)HLB柱進(jìn)一步凈化，HPLC在254nm波長(zhǎng)下測(cè)定，外標(biāo)法定量。結(jié)果顯示DES在0.02～2.0mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，線性系數(shù)(r)大于0.999；空白樣品在10.0μg/kg、50.0μg/kg、200μg/kg三個(gè)加標(biāo)水平下的平均回收率為84%～93%，RSD小于6.0%；LOQ為5.0μg/kg。

8)分散固相萃取(dispersive solid phase extraction，DSPE)

DSPE是美國(guó)農(nóng)業(yè)部于2003年起提出使用的一種新的樣品前處理技術(shù)。該技術(shù)的核心在于選擇對(duì)不同種類的農(nóng)藥都具有良好溶解性能的乙腈作為提取劑，凈化吸附劑直接分散于待凈化的提取液中，吸附基質(zhì)中的干擾成分，具有操作簡(jiǎn)便，處理快速等優(yōu)點(diǎn)，在多農(nóng)殘分析中大量應(yīng)用，目前也開(kāi)始在獸殘分析中使用。

唐曉姝建立了牛奶、酸奶、雞肉、雞肝、牛肉等動(dòng)物源食品中4種雌激素(包括DES)的DSPE-LC-MS/MS分析方法。樣品中加入乙腈沉淀蛋白質(zhì)，用無(wú)水MgSO4去除水分，再用PSA極性吸附劑分散固相萃取凈化，LC-MS/MS測(cè)定，達(dá)到簡(jiǎn)單、快速、低成本和高回收率的目的。在優(yōu)化條件下，該方法的LOD為0.66～8.26μg/L，在三個(gè)水平下的加標(biāo)回收率為75.00%～109.33%，RSD為0.24%～9.23%。Wozniak等開(kāi)發(fā)了一種QuEChERS(Quick，Easy，Cheap，Rugged，Safe)方法凈化肌肉樣品中的RALs和二苯乙烯類藥物。用乙酸乙酯提取，再用硫酸鎂和醋酸鈉分離水相和有機(jī)相，有機(jī)相中加入C18、PSA和硫酸鎂作DSPE凈化后，進(jìn)LC-MS/MS測(cè)定。方法回收率在83%～115%之間，室內(nèi)重現(xiàn)性小于22%；幾種藥物的CCa和CCβ分別低于0.23μg/kg和0.39μg/kg。

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