非甾類同化激素類藥殘留分析前處理方法——凈化（二）

時(shí)間：2023-03-25 04:05:31來(lái)源：food欄目：食品快速檢測(cè) 閱讀：

非甾類同化激素類藥殘留分析前處理方法——凈化（二）

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

3)分子印跡技術(shù)(molecularimprintingtechnology，MIT)

MIT是指為獲得在空間結(jié)構(gòu)和結(jié)合位點(diǎn)上與模板分子相匹配的聚合物制備技術(shù)，是一門(mén)源于高分子化學(xué)、生物化學(xué)、材料化學(xué)等的交叉學(xué)科。MIT就是仿照抗原-抗體的形成機(jī)理，在印跡分子(imprintedmolecule)周?chē)纬筛呓宦?lián)的剛性高分子，除去印跡分子后在聚合物的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中留下具有結(jié)合能力的反應(yīng)基團(tuán)，對(duì)模板分子表現(xiàn)出高度的選擇識(shí)別能力。

馬金余等以DES為模板分子，a-甲基丙烯酸為功能單體，二甲基丙烯酸乙二醇酯為交聯(lián)劑，合成了DES分子印跡聚合物(MIP)。所得白色塊狀聚合物經(jīng)研碎、過(guò)篩、用丙酮沉降聚合物顆粒，除去過(guò)細(xì)粉末，得到粒徑為35～45μm之間的聚合物顆粒。以該MIP為填料制成SPE小柱，應(yīng)用于DES殘留分析的樣品前處理，并比較了該MIP柱與傳統(tǒng)C18柱對(duì)DES保留行為的差異。結(jié)果表明，該MIP柱對(duì)DES有較好的富集分離效果，對(duì)加標(biāo)雞肉樣進(jìn)行了含量測(cè)定，回收率為98.7%～99.6%，CV小于1.3%，且該小柱活化后能重復(fù)使用。Jiang等采用表面MIT技術(shù)合成了--種簡(jiǎn)單的氨基功能化硅膠印跡材料，用于SPE凈化處理DES。與非印跡聚合顆粒相比，制備的DES-MIP吸附劑具有良好的吸附容量、顯著的選擇性、可結(jié)合性和快速結(jié)合動(dòng)力學(xué)特征。最大靜態(tài)吸附容量為62.58mg/g，在50mg/L水平的相對(duì)選擇性因子值為61.7，吸附劑平衡在10min內(nèi)完成。該MIP-SPE用于魚(yú)肉中DES的測(cè)定，回收率超過(guò)87.5%，RSD小于11.6%。劉瑛等應(yīng)用MIT技術(shù)，以鄰苯二胺為功能單體、DES為模板，采用循環(huán)伏安法在玻碳電極表面合成了性能穩(wěn)定的DES-MIP膜，并用50%乙醇溶液迅速去除模板，得到對(duì)DES響應(yīng)的MIP電化學(xué)傳感器。研究了此MIP傳感器的分析性能，建立了以K3Fe(CN)6為電子傳遞媒介的間接分析法。在1.0×10-7～5.1×10-6 mol/L范圍內(nèi)，DES的濃度與K3Fe(CN)6的相對(duì)峰電流變化呈線性關(guān)系。選擇性實(shí)驗(yàn)表明，此傳感器對(duì)結(jié)構(gòu)相似的分子有較強(qiáng)的抗干擾能力。

4)免疫親和色譜(immunoffinity chromatography，IAC)

IAC以抗原抗體的特異性、可逆性免疫結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)，當(dāng)含有待測(cè)組分的樣品通過(guò)IAC柱時(shí)，固定抗體選擇性地結(jié)合待測(cè)物，其他不被識(shí)別的樣品雜質(zhì)則不受阻礙地流出IAC柱，經(jīng)洗滌除去雜質(zhì)后將抗原-抗體復(fù)合物解離，待測(cè)物被洗脫，樣品得到凈化。其優(yōu)點(diǎn)在于對(duì)目標(biāo)化合物的高效、高選擇性保留能力，特別適用于復(fù)雜樣品痕量組分的凈化與富集。

張琴等以DES為半抗原制備單克隆抗體，該抗體對(duì)DES、HES和DIS的交叉反應(yīng)率分別為100%、11.36%和299.54%，IC50分別為42.54ng/mL、38.20ng/mL和14.20ng/mL。選用固定抗體的濃度約為5mg/mL凝膠與溴化氰活化的瓊脂糖4B偶聯(lián)，偶聯(lián)率在71.64%～90%之間，制備IAC柱的動(dòng)態(tài)柱容量和絕對(duì)柱容量分別為446.47～645.50ng/mL凝膠和90.47～141.10ng/mL抗體。雞肉樣品經(jīng)乙醚提取，IAC凈化，80%甲醇洗脫后，儀器測(cè)定。HPLC檢測(cè)方法的LOD為22.2ng/g，回收率為63.7%～67.6%；GC-MS檢測(cè)方法的LOD為0.33ng/g，回收率為54.1%～67.3%。

Zhang等采用IAC技術(shù)凈化牛肌肉中的ZER、TAL、ZAN和a-ZOL。采用ZER的單克隆抗體與溴化氰活化的瓊脂糖4B偶聯(lián)(偶聯(lián)率為96.3%)，制備了IAC柱，ZER、TAL、ZAN和a-ZOL的動(dòng)態(tài)柱容量分別為2639.7ng/mL、2840.3ng/mL、2731.5ng/mL、2736.3ng/mL溶膠，絕對(duì)柱容量分別為406.1ng/mg、437.0ng/mg、420.2ng/mg、421.0ng/mg MAb。選擇甲醇-水(30+70，v/v)為洗滌劑，甲醇為洗脫劑。20天內(nèi)重復(fù)使用15次后，動(dòng)態(tài)柱容量下降至1236.4ng/mL、1330.0ng/mL、1175.8ng/mL、1243.5ng/mL溶膠，仍能滿足殘留檢測(cè)的需要。牛肉經(jīng)勻質(zhì)后，甲醇提取，冷凍去脂，提取液過(guò)IAC柱，然后用磷酸緩沖液、水及甲醇-水(30+70，v/v)洗滌IAC柱，甲醇洗脫，N2吹干，衍生化后，用GC-MS檢測(cè)。該方法LOD為0.5μg/kg，在1.0-5.0μg/kg添加范圍內(nèi)，回收率為79.6%～110.7%，CV為3.2%～11.4%。王清等建立了動(dòng)物源性食品中6種玉米赤霉醇類化合物殘留量的復(fù)合免疫親和柱凈化、LC-MS/MS分析方法。魚(yú)肉、肝臟、牛奶、蜂蜜經(jīng)β-葡萄糖苷酸/硫酯酸復(fù)合酶酶解后用乙醚提取，提取液經(jīng)氮?dú)獯蹈桑瑲堅(jiān)?0%乙腈溶液復(fù)溶后過(guò)濾，濾液用PBS溶液稀釋，經(jīng)復(fù)合IAC柱富集凈化后供LC-MS/MS檢測(cè)。該方法LOD在0.04～0.10μg/kg之間，平均回收率為70.9%～95.6%，RSD為2.0%～11.8%。王昕等建立了IAC-HPLC法檢測(cè)牛奶中6種玉米赤霉醇及類似物的方法。樣品經(jīng)IAC柱凈化后，用HPLC檢測(cè)。結(jié)果表明，該方法LOD均為0.05μg/L，平均回收率在54.22%～90.76%之間，CV小于9.44%。

5)固相微萃取(solid phase micro extraction，SPME)

SPME是利用待測(cè)物在基體和萃取相間的非均相平衡，使待測(cè)組分?jǐn)U散吸附到石英纖維表面的固定相涂層，待吸附平衡后，再與GC或HPLC聯(lián)用，分離和測(cè)定待測(cè)組分。該技術(shù)不需要使用柱填充物和有機(jī)溶劑進(jìn)行洗脫，集萃取、富集和解析于一體。

鄧愛(ài)妮等建立了SPME-HPLC法測(cè)定雞肉組織和奶粉中的DES。分別考察了聚二甲基硅氧烷(PDMS，100μum)和聚丙烯酸酯(PA，85μm)兩種萃取頭纖維涂層對(duì)DES的萃取效果。結(jié)果表明，PA涂層萃取纖維頭對(duì)DES萃取效果顯著高于PDMS涂層萃取纖維頭。由于DES的雙酚結(jié)構(gòu)，使其極性得到增強(qiáng)，而具有非極性的PDMS涂層萃取頭主要用于非極性化合物的萃取。因此，選用適合于萃取極性化合物的PA(85um)涂層萃取頭；選擇30min作為最佳萃取時(shí)間；解吸時(shí)間確定為10min；在萃取溶液中不加鹽；解析液為甲醇-水(70+30，v/v)，萃取液pH5.93～6.20，攪拌速度600r/min。操作步驟為:取1.0g絞碎的雞肉試樣或3.0g奶粉試樣，加少量甲醇，振蕩并離心，取出，上清液，0.45um濾膜過(guò)濾，放入磁力攪拌子，推動(dòng)SPME裝置的手柄，將萃取頭(首次使用前用甲醇活化20min，室溫條件下風(fēng)干)浸入待測(cè)溶液內(nèi)，以600r/min的速度進(jìn)行攪拌萃取。萃取完成后，將萃取頭轉(zhuǎn)移到裝有40μL流動(dòng)相的自制解吸裝置中靜態(tài)解吸，然后將解吸液直接在230nm進(jìn)行HPLC分析。該方法LOD為0.006μg/mL，測(cè)定結(jié)果的CV小于5%，應(yīng)用于雞肉組織和奶粉中DES檢測(cè)，三個(gè)加標(biāo)水平的回收率為81.9%～93.1%。Yang等報(bào)道了采用碳納米管增強(qiáng)的中空纖維SPME(CNTs-HF-SPME)處理乳制品中DES的HPLC分析方法。中空纖維的壁孔用多壁碳納米管(MWCNTs)填充，DES被MWCNTs選擇性吸附，甲醇解吸后，HPLC測(cè)定。作者對(duì)影響CNTs-HF-SPME效果的因素，如中空纖維的長(zhǎng)度、萃取和解吸時(shí)間、萃取溫度、攪拌速度、樣品溶液的pH值、有機(jī)溶劑和鹽的量等，進(jìn)行優(yōu)化。在優(yōu)化條件下，該方法LOD為5.1μg/L，回收率良好。

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