磺胺類藥物殘留分析技術(shù)（一）

時(shí)間：2023-03-25 07:33:32來源：food欄目：食品快速檢測(cè) 閱讀：

磺胺類藥物殘留分析技術(shù)（一）

[db:作者] / 2022-12-08 00:00

2.1.4.1 前處理方法

(1)提取方法

SAs檢測(cè)常用的樣品提取方法有液液萃取法(LLE)、加壓溶劑萃取法(PLE)、超臨界流體萃取法(SFE)、基質(zhì)固相分散技術(shù)(MSPD)等，并輔以超聲輔助提取技術(shù)、微波提取技術(shù)。檢測(cè)基質(zhì)主要為動(dòng)物可食組織、牛奶、雞蛋、蜂蜜和水產(chǎn)品等。

1)液液萃取(liquid liquid extraction，LLE)

LLE是經(jīng)典的樣品處理方法。因?yàn)镾As不易溶于非極性有機(jī)溶劑，而易溶于極性有機(jī)溶劑，可以選用乙腈、氯仿、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯或者混合溶劑作為提取液。Cai等用乙腈提取，正己烷除脂，乙酸乙酯反提，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)在15min內(nèi)測(cè)定肉中的24種SAs。方法的回收率為67.8%～113.9%。Lopes等國(guó)采用低溫快速液液萃取技術(shù)(LLE-FPVLT)，建立了一種新型的檢測(cè)豬肝臟中15種SAs的多殘留分析方法。在豬肝臟樣品中加入乙，取上清液離心并用液氮浸沒15秒，分離乙腈層，蒸干后中加入0.1%的甲酸溶液復(fù)溶，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)檢測(cè)。該方法線性度相關(guān)系數(shù)R2為0.97～0.99；檢測(cè)限(CCa)為107.70～128.65ug/kg，檢測(cè)能力(CCB)為115.40～157.29ug/kg，檢出限(LOD)為5.58～16.75ug/kg，定量限(LOQ)為18.41～55.26ug/kg；在0.5、1.0、1.5倍MRL添加濃度，回收率均高于70%。Di Sabatino等用丙酮-氯仿(1+1，v/v)提取多種動(dòng)物肌肉中的10種SAs，經(jīng)陽離子交換柱凈化后，C18色譜柱分離，高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)，方法回收率在66.3%～71.5%之間，LOQ為3～14ug/kg。Wu等建立了采用LC-MS/MS同時(shí)測(cè)定豬肉及豬肝中9種磺胺類藥物殘留的檢測(cè)方法。樣品經(jīng)10%的Na2SO4溶液和乙腈-氯仿(10+1，v/v)提取，乙腈飽和正己烷去脂，使用乙二胺-.-丙基硅烷(PSA)和十八烷基鍵合相硅膠(ODSC18-N)兩種基質(zhì)分散凈化劑凈化，采用LC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)電噴霧(ESI)正離子模式測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量。9種磺胺檢出限為0.1～0.8ug/kg，在5 ug/kg、10 ug/kg、20ug/kg濃度添加水平，回收率為74.1%～115.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于6.2%。

雖然SAs屬于酸堿兩性物質(zhì)，但主要呈弱酸性，等電點(diǎn)大都在3～5的范圍內(nèi)，具有較高的極性，在酸性條件下SAs更易溶解于有機(jī)相中。因此，可在酸性條件下用有機(jī)溶劑提取，常用磷酸或乙酸調(diào)節(jié)pH以提高提取效率。Zotou等采用HPLC檢測(cè)禽肉和蛋中的12種SAs。0.6g樣品加入5mL乙腈和40uL濃磷酸提取，提取液經(jīng)正已烷液液分配凈化提取，Nexus Abselut SPE柱凈化，熒光衍生化后，用HPLC-熒光檢測(cè)器(FLD)測(cè)定，該方法在3.0～300ug/L范圍線性良好：肉的LOD為2～17μg/kg，平均回收率在96.9%～108.6%之間：蛋的LOD為2～15ug/kg，平均回收率在96.0%～108.4%之間。李鋒格等建立了一種UPLC-MS/MS方法，測(cè)定雞肝中12種SAs。樣品用1%乙酸-乙腈溶液提取，NH2吸附劑凈化，正己烷脫脂，UPLC-MS/MS檢測(cè)，內(nèi)標(biāo)法定量。該方法在5-100ug/kg濃度范圍內(nèi)線性良好(r2>0.98)：在10～50ug/kg添加水平范圍內(nèi)，平均回收率為72%～121%，RSD為1.5%～23.4%；LOD為5ug/kg，LOQ為10ug/kg。劉芃巖等以建立了一種同時(shí)測(cè)定雞肉中兩類共10種獸藥(包括3種磺胺)殘留量的LC-MS/MS方法。樣品經(jīng)2%醋酸-乙脂提取，正已烷脫脂，過ENVI-18固相萃取柱凈化，用LC-MS/MS進(jìn)行定性和定量分析。10種藥物在0.02～2.0mg/L范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.9988：LOD為1.10～6.85ug/kg，LOQ為3.68～22.85ug/kg：樣品的平均加標(biāo)回收率為68.9%～102.6%，RSD均小于8.6%。

也有采用水溶液提取動(dòng)物組織中SAs的文獻(xiàn)報(bào)道，主要是磷酸鹽緩沖液。Pang等報(bào)道了采用LC-MS/MS測(cè)定蜂蜜中16種SAs的殘留檢測(cè)方法。樣品用pH2的磷酸溶液溶解提取，陽離子交換柱和HLB柱凈化，LC-MS/MS測(cè)定。該方法線性良好(r≥0.995)；在1.0～300ug/kg添加濃度的回收率為70.9%～102.5%，RSD為2.02%～11.52%；LOQ在1.0～12.0ug/kg之間。Li等到開發(fā)了同時(shí)檢測(cè)雞肉中4種SAs和7種氟喹諾酮藥物的HPLC方法。樣品用pH6.0磷酸鹽緩沖液提取，固相萃取凈化后，HPLC測(cè)定，方法平均回收率在78.0%～105.2%之間，RSD小于9.3%；SAs的LOQ為15.0ng/g。吳銀良等明建立了同時(shí)測(cè)定牛奶中殘留的9種SAs的固相萃取-HPLC分析方法。牛奶樣品經(jīng)磷酸鹽緩沖液稀釋后高速離心去除脂肪，過C18小柱和氨基固相萃取小柱凈化后，用HPLC分析。9種SAs標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸系數(shù)均在0.9999以上；LOD為1.7～2.8ug/L，LOQ為5.7～9.2ugL：在10ugL、20ug/L、40ug/L添加水平下，添加回收率為72.1%～88.3%，RSD為2.3%～5.0%。

同時(shí)，由于SAs可以與組織蛋白以糖苷鍵結(jié)合，常采用鹽酸、三氯乙酸、高氯酸等釋放組織中SAs并沉淀蛋白，Sheridan等開發(fā)了同時(shí)測(cè)定蜂蜜中14種SAs的殘留檢測(cè)方法。首先采用鹽酸水解釋放與糖結(jié)合的SAs，再經(jīng)圓相萃取凈化后，用LC-MS/MS測(cè)定。采用該方法對(duì)來自25個(gè)國(guó)家的116個(gè)樣品進(jìn)行分析，38%被發(fā)現(xiàn)至少有一種陽性。Mohamed等則用10%三氯乙酸溶解蜂蜜樣品，將SAs從蜂蜜中釋放出來，再用Na2HPO4溶液調(diào)節(jié)至pH6.5，乙腈-二氯甲烷(4+1，vv)提取，離心并過濾后，分取濾液旋蒸至干，復(fù)溶后LC-MS/MS檢測(cè)。方法的LOD在0.4～4.5ugkg之間，LOQ在1.2～15pg/kg之間。Furusawall9建立了雞蛋中SMM、SDM和SQ的HPLC檢測(cè)方法。雞蛋采用手持式超聲被均質(zhì)器用高氯酸溶液均質(zhì)提取，提取液經(jīng)離心、超濾后，進(jìn)HPLC檢測(cè)。該方法回收率在80.3%～88.4%之間，RSD在3.4%～5.8%之間：LOD小于0.05μg/g。

2)基質(zhì)固相分散萃取(matrix solid-phase dispersion，MSPD)

MSPD快速樣品處理技術(shù)是將樣品與填料一起混合研磨，使樣品均勻分散于固定相顆粒表面，制成半固態(tài)后裝柱，然后根據(jù)“相似相溶”原理選擇合適的洗脫劑洗脫。該技術(shù)濃縮了傳統(tǒng)樣品前處理中勻漿、組織細(xì)胞裂解、提取、凈化等多個(gè)過程，避免了待測(cè)物在這些過程中的損失，提取凈化效率高、耗時(shí)短、節(jié)省溶劑、樣品用量少，但研磨的粒度大小和填裝技術(shù)的差別會(huì)使淋洗曲線有所差異。不易標(biāo)準(zhǔn)化。SAs前處理中MSPD常用填料有C18和氧化鋁等。

張素霞等以MSPD和HPLC為基礎(chǔ)，建立了常用7種SAs的多殘留快速分析方法。將豬肉組織與適量C18填料混合研磨，制成半固態(tài)裝柱，SAs經(jīng)二氯甲烷洗脫后直接用反相HPLC檢測(cè)，可在1h內(nèi)完成測(cè)定，LOD為0.01～0.1mgkg，在0.1～0.5mg/kg添加濃度范圍內(nèi)，7種SAs的平均回收率為70.6%±20.3%。Long等以開發(fā)了牛奶中8種SAs的殘留檢測(cè)方法。0.5mL牛奶加入2g C18含鍵合硅膠混勻，裝柱，用8mL正已烷淋洗，8mL二氯甲烷洗脫，HPLC在270nm測(cè)定。該方法回收率在(73.1%±7.4%)～(93.7%±2.7%)之間，批內(nèi)精密度為2.2%～6.7%。該作者用類似的MSPD技術(shù)，建立了豬肉和魚肉中SAs的殘留分析方法。Zou等以C18為吸附劑，基于MSPD技術(shù)，建立了蜂蜜中8種SAs的HPLC分析方法。在10～250ug/kg添加濃度范圍，方法回收率大于70%，RSD小于16%，LOD為0.4μg/kg。

Kishida等2用中性氧化鋁做MSPD的吸附劑，與雞肉混合裝柱，不用平衡和洗滌，直接70%乙醇洗脫，HPLC檢測(cè)雞肉中的6種SAs。該方法平均回收率為87.6%，RSD為0.5%～8.6%。該作者還采用該MSPD方法應(yīng)用于牛奶、雞肉、牛肉和豬肉中多種SAs殘留的快速檢測(cè)，方法回收率大于87.6%，LOD在6～40ug/kg之間。

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