硫脲嘧啶類藥物測定方法（二）

時間：2023-03-24 21:57:39來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

硫脲嘧啶類藥物測定方法（二）

[db:作者] / 2022-12-22 00:00

(4)薄層色譜法(thin layer chromatography，TLC)

Briggemann等在化學(xué)比色法的基礎(chǔ)上將TLC結(jié)合進(jìn)來檢測硫脲嘧啶類藥物。硫脲嘧啶類藥物與2，6-二氯醌氯亞胺(2，6-dichloroquinone-chloroimide)特異性顯色反應(yīng)，通過TLC初步分離，顯色測定。在隨后的研究中，該方法又得到了改進(jìn)。De Brabander等用甲醇均質(zhì)提取組織樣品后，用NBD-CI與硫脲嘧啶類藥物衍生反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物再采用二維高效薄層色譜(2D-HPTLC)分離，堿性半胱氨酸試劑對斑點顯色，出現(xiàn)熒光斑點。該方法靈敏度可以降低到10ppb。1984年，De Brabander等又在該方法中增加了汞基柱的凈化步驟，成為歐盟硫脲嘧啶類藥物殘留檢測官方方法的制定依據(jù)。

(5)氣相色譜法(gas chromatography，GC)

硫脲嘧啶類藥物極性較強，用GC測定是往往需要先進(jìn)行衍生化，再采用氮磷檢測器(NPD)、火焰光度檢測器(FPD)或電子捕獲檢測器(ECD)檢測。

Pensabene等建立了組織中4種硫脲嘧啶類藥物的GC-NPD測定方法。組織樣品用乙腈-水(10+1，v/v)提取，石油醚LLP除去脂肪，再用硅膠SPE柱凈化后，提取物加入MSTFA于55℃衍生反應(yīng)30min，用丙酮定容后GC-NPD測定。采用DB-5MS毛細(xì)管柱(30m×0.25mm i.d，0.25μm)程序升溫分離。方法檢出限(S/N=2：1)為0.05μg/g；硫脲嘧啶回收率為93.5%±2.9%，甲巰咪唑為90.3%±3.0%，甲基硫脲嘧啶為87.5%±2.9%，丙基硫脲嘧啶為85.1%±5.8%。Laitem等開發(fā)了動物組織中甲基硫脲嘧啶的GC-FPD檢測方法。乙酸乙酯提取物在50℃用氮氣吹干，用0.5mL苯-甲醇(85+15，v/v)復(fù)溶，過Sephadex柱凈化，苯-甲醇(85+15，v/v)洗脫，棄去前3mL，收集4-7mL。氮氣吹干后，加入1mL 0.1mol/L醋酸鉀的乙醇溶液和50μL碘甲烷，55℃衍生化反應(yīng)70min，再吹干，固體殘留物用1mL雙蒸水復(fù)溶，再用3×1mL苯萃取，濃縮至1mL后，進(jìn)GC檢測。NPD檢測器配置394nm濾光片，玻璃管柱(1.8m×4ini.d.)用含3%0V-1的擔(dān)體WHP(SO-100目)填充，以氮氣為載氣，流速35mL/min，氫氣流速40mL/min，空氣流速170mL/min，進(jìn)樣口溫度200℃，爐溫180℃，檢測器溫度175℃。該方法檢測靈敏度為10ppb，回收率在50%左右。

DeBrabander等介紹了一種采用GC-ECD檢測硫脲嘧啶類藥物的殘留分析方法。樣品溶液(奶、血液、尿或含水提取物)用醋酸苯汞環(huán)己烷溶液-一步提取和凈化，藥物與汞形成復(fù)合物進(jìn)入環(huán)已烷層，蒸干后，用PFB-Cl衍生化反應(yīng)，形成五氟氯化芐衍生物，GC-ECD檢測。方法檢測限為0.2ppb。

(6)高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)

硫脲嘧啶類藥物主要采用反相高效液相色譜(RP-HPLC)，配備紫外檢測器(UVD/DAD)和化學(xué)發(fā)光檢測器(CLD)測定。

Buick等建立了甲狀腺和血清中的甲巰咪唑、硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶、丙基硫脲嘧啶和苯基硫脲嘧啶的HPLC-DAD檢測方法。采用RP-18色譜柱(250mm×4mm，10μm)分離，乙腈和0.025mol/L磷酸鹽緩沖液(pH3)為流動相，梯度洗脫，甲巰咪唑在258nm處檢測，其他藥物在276nm檢測。甲狀腺中5種藥物的回收率在18.0%～75.4%之間，日間CV不超過25.88%，檢測靈敏度為2.45～4.52ng/g；血清中5種藥物的回收率在40.0%～92.6%之間，日間CV不超過26.67%，檢測靈敏度為16.98～35.25ng/mL。Hollosi等建立了魚肉中甲巰咪唑、甲硫脲、甲脲乙醇酸酐和巰基咪唑的HPLC-UVD檢測方法。用Atlantis dC18色譜柱(150mm×4.0mm，5μm)分離，甲醇和pH6.7磷酸鹽緩沖液為流動相，梯度洗脫，流速1mL/min，甲巰咪唑和巰基咪唑在255nm檢測，甲硫脲和甲脲乙醇酸酐在220nm檢測。該方法回收率在85.2%～97.6%之間；甲巰咪唑、甲硫脲、甲脲乙醇酸酐和巰基咪唑的LOD(S/N=3：1)分別為0.06μg/mL、0.10μg/mL、0.43μg/mL和0.06μg/mL。Asea等也用HPLC-UVD測定了動物甲狀腺和肌肉中的甲巰咪唑和巰基苯并咪唑。采用C18色譜柱分離，甲巰咪唑和巰基苯并咪唑分別在255nm和300nm處檢測。Chernovyants等用HPLC-UVD檢測了尿液中的丙基硫脲嘧啶、甲基咪唑硫酮和甲基咪唑硫酮乙酯。采用Diasfer-110-C18反相色譜柱(5um，150mm×4.0mm)分離，流動相為乙腈-pH6.86磷酸鹽緩沖液(25+75，v/v)，流速1mL/min，檢測波長為：甲基咪唑硫酮254nm，丙基硫脲嘧啶275nm，甲基咪唑硫酮乙酯292nm。甲基咪唑硫酮、丙基硫脲嘧啶和甲基咪唑硫酮乙酯的檢測限分別為0.29mg/L、0.26mg/L和0.24mg/L。

Wei等開發(fā)一種利用HPLC-柱后-CLD測定血清中丙基硫脲嘧啶和甲基硫脲嘧啶的分析方法(圖19-15)。分析柱為Nucleosil C18(250mm×4.6mmid，5um)，流動相為甲醇-水(40+60，v/v)，等度洗脫，流速1mL/min。柱后流出物先與甲醛反應(yīng)，再與KMnO4溶液在混合線圈中反應(yīng)，柱后反應(yīng)溶液流速為2mL/min。反應(yīng)所發(fā)射的光由光電倍增管(-800V)監(jiān)測。該方法LOD為0.03μg/mL，LOQ為0.1ug/mL；回收率在90%～110%之間，RSD小于5%。

圖19-15 HPLC-CLD檢測示意圖

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