河豚魚、鰻魚和烤鰻中16種苯并咪唑類藥物殘留量測定分析條件的選擇

[db:作者] / 2022-12-22 00:00

17.2.2.7 分析條件的選擇

(1)提取條件的優化

1)提取劑

苯并咪唑類藥物分子基本上是中等極性分子，其水溶性很差，考慮到乙酸乙酯和二氯甲烷的極性與BZs接近，BZs在其中溶解能力較強，分別對乙酸乙酯、二氯甲烷、DMF(二甲基甲酰胺)、DMSO(二甲亞砜)等有機溶劑提取BZs的提取效率進行試驗。

試驗結果表明采用二氯甲烷提取BZs，回收率均低于50%；與采用單純的乙酸乙酯作提取劑相比，DMSO與乙酸乙酯混合溶劑對苯并咪唑的提取無明顯幫助，且給后續的處理帶來麻煩；

DMF與乙酸乙酯混合溶劑對2AA、ASOX、THI-OH三種極性較大的代謝物的回收率有明顯的負影響，回收率下降至只有10%～20%，而采用堿性乙酸乙酯提取BZs，回收率可穩定在理想水平。

2)提取劑pH

BZs是弱堿性化合物，pH對具有弱堿性的物質的溶解性或分配系數影響很大，調節pH使組分在水相中處于中性分子狀態，或達到兩性分子的等電點，水溶性降低，易被有機溶劑萃取。分別以不加堿液、0.5mL 1mol/L KOH、0.2mL 50%KOH、0.4mL 50%KOH作對比試驗考察提取溶劑pH對苯并咪唑藥物在動物組織中提取效率的影響，試驗結果表明提取劑的pH高低對ALB、OXI的回收率無明顯影響，CAM、FEN、FLU、MEB、OXFSUL、THI、THI-OH在較高堿液濃度(0.4mL 50%KOH)時回收率明顯下降一半，2AA、ASOX、ASF的回收率下降至10%以下?；谝陨显囼灲Y果，當同時測定16種苯并咪唑藥物殘留時綜合考慮極性較大的幾種代謝物受pH影響明顯的現象，以0.15mL 50%的氫氧化鉀-乙酸乙酯作提取劑。

3)抗氧化劑

一些苯并咪唑藥物在樣品前處理過程中易發生氧化反應而致損失，所以試驗過程中在樣品提取及隨后的蒸發濃縮過程中加入抗氧化劑以保護分析物，分別試驗了不同濃度的BHT(丁基化羥基甲苯)、BHA，試驗結果表明加入1%BHT或BHA可明顯提高0XF、OXFSUL、ASOX、ASF的回收率，對THI、MEB的回收率也有好的影響，BHT對分析物的保護作用稍好于BHA。

(2)凈化條件的優化

樣品用堿性乙酸乙酯提取，由于乙酸乙酯屬中等極性溶劑，有可能提取出類脂物，因此提取濃縮后需去除類脂物。脫脂溶劑選擇了對類脂物有良好溶解度而對苯并咪唑類藥物溶解度最小的正己烷。為保證部分水溶性較小的苯并咪唑類藥物組分在脫脂時的回收率，采用乙腈-0.1mol/L HCL-正己烷萃取脫脂。

試驗中選擇了國內外目前最常用的WATERSOasisMCX8固相萃取柱進行試驗，考慮到動物樣品成分復雜，特別是動物肝臟樣品較臟，為防止樣品過載導致回收率下降，選用了150mg/6mL的MCX柱。根據MCX柱的保留特性，應在酸性條件下.上柱，使待測物呈陽離子鍵合吸附，所以采用0.1mol/LHCL稀釋樣液上柱，保證樣品在柱上有強保留。

洗滌是除去不需要的組分或雜質，所用溶劑的極性一般略強于或等于樣品溶劑的極性。試驗結果表明酸性條件下用100%甲醇溶液洗滌SPE柱，組分無損失，故選用5 mL 0.1 mol/L HCL，5mL甲醇溶液作為洗滌溶劑。

氨水-乙腈溶液對于MCX固相萃取柱是強溶劑。試驗中依次增加氨水含量的乙腈溶劑體系進行洗脫試驗，試驗結果表明采用10%氨水乙腈作為洗脫試驗液可保證所測組分的充分洗脫，同時進行10%氨水乙腈洗脫液的體積淋洗試驗，結果表明大于12mL時可以淋洗完全。最后選擇15mL 10%氨水乙腈溶液作為洗脫溶劑。

(3)儀器條件的優化

試驗了不同有機溶劑(甲醇、乙腈)對苯并咪唑分子的離子化影響，試驗結果表明大部分苯并咪唑類藥物分子采用乙腈作為流動相中的有機溶劑時，較之采用甲醇作為流動相能得到更強的質譜信號，表明乙腈比甲醇更有利于苯并咪唑類分子的離子化。

根據文獻的描述，選定了16種苯并咪唑類驅蟲藥的二級質譜產物離子各：二對共計三十二個，進行質譜離子源參數的優化，包括電壓參數：去簇電壓(DP)，聚焦電壓(FP)，入口電壓(EP)，碰撞能(CE)、碰撞池出口電壓(CXP)，電離電壓(IS)；氣流參數：霧化氣(NEB)，氣簾氣(CUR)，輔助氣(AUX)，碰撞氣(CAD)；輔助氣溫度(TEM)。

研究了苯并咪唑類藥物的二級質譜離子產生途徑，研究結果表明苯并咪唑類驅蟲藥的母核是一個相對穩定的共軛體系，在通常的碰撞能量范圍內(CE15-60V)較少發生開環重排反應，苯并咪唑驅蟲藥的碰撞裂解反應大部分是發生在取代基位置。苯并咪唑類藥物從結構上可細分為氨基甲酸酯類和噻苯咪唑二個亞類，在所研究的十多種苯并咪唑類藥物和代謝物中，氨基甲酸酯類和噻苯咪唑類藥物的質譜碎裂途徑各有其特點。根據十五課題的研究成果，選定了十六個苯并咪唑類藥物和代謝物的定性離子對。

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