大環(huán)內(nèi)酯類和林可胺類藥物殘留測(cè)定方法——高效液相色譜法

時(shí)間：2023-03-25 05:44:20來(lái)源：food欄目：食品快速檢測(cè) 閱讀：

大環(huán)內(nèi)酯類和林可胺類藥物殘留測(cè)定方法——高效液相色譜法

[db:作者] / 2022-12-12 00:00

(5)高效液相色譜法(highperformanceliquidchromatography，HPLC)

HPLC可分析沸點(diǎn)在500℃以上、大分子、強(qiáng)極性和熱穩(wěn)定性差的化合物，在獸藥殘留分析中得以廣泛應(yīng)用。MALs和林可胺類藥物常用的檢測(cè)器有紫外檢測(cè)器(ultravioletdetector，UVD)和二極管陣列檢測(cè)器(diode-arraydetector，DAD；photo-diodearraydetector，PDA)，也有采用電化學(xué)檢測(cè)：器(electrochemicaldetector，ECD)和熒光檢測(cè)器(fluorescencedetector，F(xiàn)LD)的報(bào)道。

1)UVD、DAD/PDA檢測(cè)

Prats等建立了不同動(dòng)物組織中的泰樂(lè)菌素殘留量的HPLC法。該方法應(yīng)用氯仿或乙酸乙酯在堿性的條件下提取肌肉、肝臟、腎臟和脂肪組織中的泰樂(lè)菌素，使用C18反相色譜柱進(jìn)行分離，乙腈-水(含0.04mol/L的磷酸氫二鈉，pH2.4)為流動(dòng)相，最后用UVD進(jìn)行檢測(cè)。在50～500μg/kg的添加濃度范圍內(nèi)線性良好，LOQ可達(dá)到50ppb?？卓频葘⑷怆u中的肌肉、肝臟、腎臟和脂肪組織制備勻漿后，用乙腈、石油醚和二氯甲烷液液分配凈化泰樂(lè)菌素，濃縮后用乙腈定容，以乙腈-甲醇-0.005mol/L磷酸二氫銨溶液(60+30+10，v/v)為流動(dòng)相，HPLC分離，UVD進(jìn)行檢測(cè)。樣品前處理最終溶液中的泰樂(lè)菌素LOD為0.05mg/L，在肌肉、脂肪、肝臟和腎臟組織中的LOD均為0.10mg/L，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍為0.10～6.40mg/L。張永創(chuàng)建立了豬肉中替米考星殘留量的檢測(cè)方法。以乙腈、水、四氫呋喃為流動(dòng)相，HPLC-DAD在波長(zhǎng)290nm檢測(cè)，進(jìn)樣量為100μL。方法LOD為0.01ug/g，LOQ為0.02ug/g。劉曄等測(cè)定豬肝中的MALs，樣品經(jīng)甲醇提取后，用scx固相萃取柱進(jìn)行凈化，再以0.025mol/L磷酸緩沖液-乙腈(pH2.5)為流動(dòng)相，在C18分離柱上梯度洗脫，HPLC-DAD檢測(cè)，方法LOD為0.01～0.037μg/mL，在0.2～20μg/mL范圍內(nèi)峰面積與質(zhì)量濃度成良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)大于0.998。王斌、李存、王雪敏等44461分別建立了動(dòng)物(牛、豬、雞)肺臟、豬組織、羊組織中替米考星殘留量的HPLC檢測(cè)方法。樣品用乙腈提取，Ci8固相萃取柱凈化，UVD在290nm波長(zhǎng)測(cè)定。方法LOD為0.01mg/kg，LOQ為0.04mg/kg；在0.04mg/kg、0.1mg/kg、1.0mg/kg、10.0mg/kg；添加水平，方法平均回收率在76.8%～94.1%之間，CV在2.7%～8.6%之間。楊方等利用HPLC法同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)品中螺旋霉素和泰樂(lè)菌素藥物殘留。以乙腈和pH2.5磷酸緩沖溶液的混合液作流動(dòng)相，在MeckPurospherSTAR RP18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱上梯度洗脫、分離，在232nm、287nm分別對(duì)螺旋霉素及泰樂(lè)菌素進(jìn)行紫外檢測(cè)。方法平均回收率為82.2%～89.0%，RSD為6.24%～9.83%。劉永濤、蘇秀華等148.49)建立了檢測(cè)水產(chǎn)品肌肉組織中螺旋霉素、替米考星、泰樂(lè)菌素、北里霉素的UPLC檢測(cè)方法。以乙腈-25mmol/L磷酸二氫銨(pH2.5，含10%乙腈)為流動(dòng)相，ACQUITYUPLCBEH C18色譜柱分離，UVD(232nm-螺旋霉素，287nm-泰樂(lè)菌素)測(cè)定。方法平均回收率為70%～102%，RSD為2.9%～11.2%，螺旋霉素、替米考星、泰樂(lè)菌素和北里霉素的LOD分別為25μg/kg、25ug/kg、50ug/kg、75ug/kg。

吳寧鵬等建立了牛奶中替米考星殘留量的檢測(cè)方法。樣品經(jīng)乙腈提取，C18柱凈化處理，290nm波長(zhǎng)下進(jìn)行HPLC測(cè)定。在添加濃度0.025μg/mL、0.05ug/mL、0.10μg/mL水平，方法的平均回收率在72.1%～85.8%之間，日內(nèi)CV在7.0%～10.7%之間，日間CV在3.5%～5.4%之間，LOD為0.005μg/mL。Garcia-Mayor等建立了羊奶中MALs殘留的HPLC-DAD檢測(cè)方法。樣品經(jīng)氫氧化鈉和乙酸乙酯去除蛋白后，用堿水解除脂，HPLC-DAD測(cè)定。方法的回收率為55%～77%，RSD為1%～6.5%。王海濤等建立了牛奶中替米考星、泰樂(lè)菌素和螺旋霉素殘留量的HPLC同時(shí)檢測(cè)方法。以甲醇為提取液，SCX固相萃取柱凈化，0.05moL/L磷酸二氫鈉溶液-乙腈為流動(dòng)相，在ORBAXEclipseXDB C18 (5um，150mm×4.6mm id)反相色譜柱.上進(jìn)行分離，梯度洗脫，流速1mL/min，用DAD檢測(cè)。替米考星、泰樂(lè)菌索和螺旋霉素的LOD分別為30μg/kg、20μg/kg、40μg/kg，線性范圍為20～800ug/kg，平均回收率為88.8%～99.4%，RSD為2.2%～8.9%。

趙明建立了蜂蜜中林可霉素殘留的HPLC檢測(cè)方法。樣品經(jīng)提取、凈化、反相HPLC分離后，用DAD進(jìn)行檢測(cè)。流動(dòng)相為硼砂緩沖液(pH5.0)-甲醇-乙腈(70+26+4，v/v)，流速為1.0mL/min，進(jìn)樣量為20uL，檢測(cè)波長(zhǎng)為204nm。在1.0～20μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，方法LOD為75ng/g，平均回收率為93.02%，日內(nèi)CV小于1.58%，日間CV小于1.49%。

2)ECD檢測(cè)

Hanada等建立了鼠肝臟中紅霉素檢測(cè)的HPLC-ECD檢測(cè)方法。氧化紅霉素的檢測(cè)池電勢(shì)為+1100mV，線性范圍為0.5～100.0μg/g，而后應(yīng)用于臨床靜脈給藥后的濃度測(cè)定，完全符合紅霉素在小動(dòng)物藥動(dòng)學(xué)研究中的特點(diǎn)，因此該方法是可靠的。Luo等建立了反相HPLC用于魚(yú)組織中林可霉素殘留的檢測(cè)方法。組織樣品用磷酸二氫鉀緩沖液(pH4.5)進(jìn)行提取，C18柱凈化，50%乙腈進(jìn)行洗脫，再使用乙酸乙酯進(jìn)行提取，最后用離子對(duì)HPLC-ECD檢測(cè)。魚(yú)肉的LOD可以達(dá)到7ng/g，LOQ可以達(dá)到17ng/g；魚(yú)皮的LOD可以達(dá)到12ng/g，LOQ可以達(dá)到24ng/g。

3)FLD檢測(cè)

于慧娟等采用HPLC-FLD技術(shù)建立了對(duì)蝦中紅霉素殘留量的測(cè)定方法。以乙腈為提取溶劑，40mg/mL的NaCl水溶液溶解殘?jiān)?，正己烷去脂、二氯甲烷反萃取，再向乙腈溶液中加?00uL 0.1moL的KH2PO4(pH7.5)和100uL 2.5mg/mL的衍生試劑(FMOC-CL)，于40℃衍生化反應(yīng)1h，HPLC-FLD測(cè)定，激發(fā)波長(zhǎng)255nm，發(fā)射波長(zhǎng)315nm。方法LOD為150ug/kg，回收率在75%以上。汪金菊建立了雞體內(nèi)阿奇霉素及消除規(guī)律研究的HPLC-FLD方法。試驗(yàn)樣品(血漿、肌肉、肝臟)經(jīng)過(guò)氫氧化鈉堿化后，用正已烷提取凈化，吸取適量有機(jī)層45℃氮?dú)獯蹈?，再加入衍生試?-芴基氯甲酸酯和硼酸鹽緩沖液置于50℃水浴鍋中衍生40min，最后加入甘氨酸作為終止液，上機(jī)檢測(cè)。試驗(yàn)采用AgilentC18柱(4.6mm×250mm)作為分離色譜柱，選擇0.05mol/L磷酸鹽緩沖液(含0.2%三乙胺)-乙腈(29+71，v/v，pH5.8)混合液為流動(dòng)相，激發(fā)波長(zhǎng)為265nm，發(fā)射波長(zhǎng)為315nm，流速1.2mL/min，柱溫35℃，進(jìn)樣量為20uL。測(cè)得血漿中阿奇霉素LOD為0.02μg/mL，肌肉和肝臟為0.03ug/g，LOQ三者均為0.04μg/mL，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍為0.04～5μg/mL。

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