可食動(dòng)物肌肉、肝臟和水檢測(cè)中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y(cè)定——分析條件的選擇

[db:作者] / 2022-12-09 00:00

4.2.2.6測(cè)定

(1)液相色譜條件

色譜柱：Discovery C18色譜柱，5μm，150mm×2.1mm(內(nèi)徑)或相當(dāng)者；柱溫：40℃；流動(dòng)相：甲醇+水(40+60，v/v)；流速：0.30mL/min；進(jìn)樣量：20μL。

(2)質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源；掃描方式：負(fù)離子掃描；檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；電噴霧電壓：-1750V；霧化氣、氣簾氣、輔助加熱氣、碰撞氣均為高純氮?dú)饧捌渌线m氣體；使用前應(yīng)調(diào)節(jié)各氣體流量以使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測(cè)要求；輔助氣溫度：500℃；定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、采集時(shí)間、去簇電壓及碰撞能量見表4-7。

(3)定性測(cè)定

每種被測(cè)組分選擇1個(gè)母離子，2個(gè)以上子離子，在相同實(shí)驗(yàn)條件下，樣品中待測(cè)物和內(nèi)標(biāo)物的保留時(shí)間之比，也就是相對(duì)保留時(shí)間，與標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)的相對(duì)保留時(shí)間偏差在±2.5%之內(nèi)；且樣品中各組分定性離子的相對(duì)豐度與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)的定性離子的相對(duì)豐度進(jìn)行比較，偏差不超過(guò)表1-5規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對(duì)應(yīng)的待測(cè)物。

(4)定量測(cè)定

在儀器最佳工作條件下，對(duì)基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)樣，以標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)組分峰面積和氘代氯霉素(d5-氯霉素)峰面積的比值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)組分濃度與氘代氯霉素(d5-氯霉素)濃度的比值為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量，樣品溶液中待測(cè)物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測(cè)定的線性范圍內(nèi)。內(nèi)標(biāo)法定量。

4.2.2.7 分析條件的選擇

(1) 提取凈化條件的選擇

1)樣品提取液的選擇

甲砜霉素、氟苯尼考易溶于乙酸乙酯、乙腈。試驗(yàn)表明，采用堿化乙酸乙酯可提高甲砜霉素回收率，使上述兩個(gè)化合物回收率都符合要求，因此本實(shí)驗(yàn)選用堿化乙酸乙酯作為提取溶劑。分別用乙酸乙酯-25%氨水(100+1)、乙酸乙酯-25%氨水(100+2)和乙酸乙酯-25%氨水(100+3)的堿性乙酸乙酯作為提取液，在同--添加水平，相同實(shí)驗(yàn)條件下，三者均能達(dá)到滿意的回收率。但乙酸乙酯-25%氨水(100+3)的堿性乙酸乙酯的回收率實(shí)驗(yàn)更穩(wěn)定。因此在本方法中選擇含有乙酸乙酯-25%氨水(100+3)的堿性乙酸乙酯作為提取液。

2) 凈化條件的選擇

樣品的乙酸乙酯萃取液中含有類脂物，需凈化。通過(guò)實(shí)驗(yàn)以水-正己烷液液分配除脂，效果明顯且回收率高。

3) 殘?jiān)芙舛葘?shí)驗(yàn)

樣品的乙酸乙酯萃取液濃縮后，殘?jiān)盟芙?。分別用1mL、2mL、3mL水溶解殘?jiān)?，結(jié)果表明1mL、2mL、3mL水溶解殘?jiān)?，氯霉素和氟苯尼考的回收率無(wú)明顯差異，回收理想。而以3mL水溶解殘?jiān)?，且超?min，甲砜霉素的回收率最高。因此采用3mL水溶解殘?jiān)?，且超?min。

(2) 儀器條件的優(yōu)化

1) 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

蠕動(dòng)泵以10uL/min的流速連續(xù)注射0.1mg/L的氯霉素類標(biāo)準(zhǔn)溶液入TurbolonSpray電離源中，在負(fù)離子檢測(cè)方式下對(duì)三種氯霉素類進(jìn)行一級(jí)質(zhì)譜分析(Q1掃描)，得到分子離子峰，對(duì)各準(zhǔn)分子離子峰進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析(子離子掃描)，得到碎片離子信息。由此確定定性用的各離子對(duì)。采用MRM模式采集數(shù)據(jù)，選擇駐留時(shí)間為200ms，優(yōu)化各離子對(duì)的去簇電壓(DP)，碰撞氣能量(CE)，聚焦電壓(FP)，入口電壓(EP)，碰撞池出口電壓(CXP)。

2) 色譜條件的優(yōu)化

采用“T”三通方式，即蠕動(dòng)泵以10μuL/min的流速連續(xù)注射0.1mg/L的氯霉素類標(biāo)準(zhǔn)溶液，流動(dòng)相則以300uL/min的流速與氯霉素類標(biāo)準(zhǔn)溶液混合后進(jìn)入離子源來(lái)進(jìn)行優(yōu)化。當(dāng)分別用0.1%甲酸、0.1%乙酸、1mmol/L醋酸銨溶液代替流動(dòng)相組成中的水，未發(fā)現(xiàn)氯霉素靈敏度的明顯變化。實(shí)驗(yàn)以乙腈-水(30+70，v/v)作為流動(dòng)相，未觀察到CAP靈敏度的顯著提高。以甲醇-水(40+60，v/v)作為流動(dòng)相，靈敏度足以滿足要求。

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